Detección de cortisol en pelo como biomarcador de estrés crónico en perros de trabajo de las FAS / Hair cortisol detection as biomarker of chronic stress in military working dogs

JUSTIFICACIÓN: La medición de cortisol en pelo, es una técnica no invasiva que proporciona una imagen retrospectiva de su acumulación durante un periodo de tiempo prolongado. Objetivo: Determinar los niveles de cortisol en pelo en perros de trabajo como biomarcador del estrés crónico, así como el efecto de factores como la estacionalidad y el despliegue en operaciones internacionales. Diseño: El estudio se realizó en el Laboratorio de Investigación Aplicada, con un total de 24 perros del ET sometidos a distintas condiciones ambientales. Metodología: Las muestras de pelo se analizaron mediante un ensayo tipo ELISA (Enzyme-LinkedImmuno-SorbentAssay) para medir la concentración de cortisol, previa extracción alcohólica. Resultados: La concentración media de cortisol fue significativamente superior en primavera respecto al verano y no se encontraron efectos significativos debidos al despliegue. Conclusión: El presente trabajo desvela una concentración diferencial en los niveles de cortisol en pelo de perros de trabajo debido a la estación del año

JUSTIFICACIÓN: The measurement of hair cortisol, is a noninvasive technique that provides a retrospective of its accumulation over a period of time. OBJECTIVE: To investigate the levels of cortisol in dogs as a biomarker of chronic stress, and the effect of factors such as season and deployment. DESIGN: The study was conducted in the LIA, with a total of 24 dogs subjected to differential environmental conditions. METHODS: Hair samples were analyzed by ELISA for measuring cortisol concentration after alcoholic extraction. RESULTS: The mean concentration of cortisol in dogs was significantly higher in spring than summer, and no significant effects of deployment were found. CONCLUSION: This study reveals different levels of cortisol concentration in hair dog's between seasons

Evaluación del bienestar en potros y caballos jóvenes del Centro Militar de Cría Caballar de Écija (Sevilla) / Assessment of the welfare of foals belonging to the Centro Militar de Cría Caballar (Military Centre for Horse Breeding) of Écija (Sevilla)

INTRODUCCIÓN: El bienestar animal surge del conocimiento de los animales como seres que experimentan dolor, sufrimiento o estrés. La evaluación del bienestar en potros incluye aspectos como el comportamiento, la salud, y la forma en la que los animales responden al manejo. La evaluación debería detectar signos que puedan derivar en situaciones de estrés. OBJETIVOS: Establecer las bases metodológicas para la evaluación del bienestar de potros y caballos jóvenes y evaluar el sistema de manejo de los futuros reproductores. MATERIAL Y MÉTODOS: Desarrollo de un protocolo adaptado para potros, mediante la ponderación de 45 indicadores y la evaluación de bienestar de 104 potros de recría en libertad (69 machos y 35 hembras). RESULTADOS: Con el protocolo propuesto se pudieron observar algunas desviaciones en el estado de bienestar de los animales. Los indicadores de alojamiento revelaron que había zonas de humedad y otras con riesgo de lesión. En los indicadores de alimentación, la condición corporal era adecuada ya que sólo estaba aumentada en un 21,36 % de los casos. No se observaron comportamientos anormales. Los indicadores de salud mostraron algunos casos de dolor en el dorso (23,61%), bastantes con descarga nasal (76,47%) y también algunos con descarga ocular (16,35%), así como problemas dérmicos (8,65%) resultante de picazón o rascado. Se encontró una incidencia elevada de heridas en la región de las extremidades (90,38%). CONCLUSIÓN: La metodología seguida para la evaluación del bienestar ha permitido obtener una primera información y determinar problemas de salud y comportamiento de la futura población reproductora

INTRODUCTION: Animal welfare arises from the knowledge of animals as beings that experience pain, suffering or stress. The welfare assessment in foals includes behaviour, health and individual response to management. Evaluation should check for signs that may lead to stress situations. OBJECTIVES: Proposal a methodological basis for evaluating the welfare of future breeding horses and the welfare assessment of management system. MATERIAL AND METHODS: Development of a protocol adapted to foals by weighting 45 indicators and welfare assessment of 104 foals breed in freedom (69 males and 35 females). RESULTS: The implementation of the protocol resulted in the detection of significant deviation in the welfare of animals. Housing indicators revealed areas with wet condition and a risk of injury. Abnormal behaviours were not observed in the foal population. Health indicators revealed incidence of back pain (23.61%), nasal (76.47%) and ocular (16.35%) discharge, and a low level of alterations in the tegument (8.65%) consequence of itchiness or rubbing. A higher incidence of body lesions in the limbs was observed (90.38%). CONCLUSION: The protocol for welfare assessment developed in the present study provided first insights and detection of suboptimal health status and behaviour of the future breeding population

Evaluación de la longitud de los telómeros en caballos, mediante el uso de la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa / Assessment of the length of horse telomeres using the quantitative polymerase chain reaction

INTRODUCCIÓN: Los telómeros son estructuras de los cromosomas eucariotas, que juegan un importante papel en el mantenimiento de la estabilidad e integridad celular, estableciéndose como uno de los posibles biomarcadores del envejecimiento celular en el hombre y otras especies. OBJETIVOS: Evaluar la posibilidad del uso de la técnica de la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR) para calcular la longitud relativa de los telómeros en caballos y asociarla con factores como la edad, la raza y el y el sexo. Material y métodos: Se amplificó una secuencia repetitiva correspondiente a los telómeros, junto con otra de un gen de copia única (Interleukina-2), en muestras de sangre de 175 caballos de tres razas, de distintos grupos de edad y de ambos sexos. Se calculó la longitud relativa de los telómeros de cada individuo a través dos variables de respuesta: la diferencia entre el número de ciclos de cuantificación entre telómeros e Interleukina-2 (Dif Cq) y la ratio entre ambos valores (T/S ratio). RESULTADOS: La variable Dif Cq presenta una asociación más fuerte con la edad que la variable T/S ratio. Se observó una correlación negativa entre la edad y la longitud de los telómeros (R= -0,31, p < 0,05). CONCLUSIÓN: La técnica de qPCR es aplicable para determinar la longitud relativa de los telómeros en caballos. Los individuos mayores de 20 años presentan telómeros acortados, aunque no se encontró un efecto significativo ni de la raza, ni del sexo

INTRODUCTION: Telomeres are specialized structures at the ends of eukaryotic chromosomes which play an important role in the maintenance of cell integrity and stability. The telomere length is considered one of the potential biomarkers of cellular aging. OBJECTIVES: To evaluate the possible use of quantitative polymerase chain reaction qPCR in the estimation of relative length of equine chromosome telomeres. MATERIAL AND METHODS: A repetitive sequence corresponding to telomeres and a single copy gene (Interleukin-2) were amplified from blood samples of 175 horses of three breeds, different ages and both sexes. The relative length of telomeres of each individual was calculated by means of the response variables: the difference of quantification cycles number between telomeres and Interleukin-2 (Dif Cq) and the ratio between both values (T/S ratio). RESULTS: The variable Dif Cq has a stronger association with the age than the variable T/S ratio. There was a negative correlation between the age and telomere length (R= -0,31, p < 0,05). CONCLUSION: The qPCR technique is applicable to determine the relative length of telomeres in horses. The length of the telomeres shorten significantly from age 20, although no effect was found over the breed or sex

Selección de genes de referencia en semen equino criopreservado para su uso en estudios de expresión genética con la técnica de PCR cuantitativa / Reference genes selection in cryopreserved equine semen for its use in studies of gene expression with the quantitative PCR technique

INTRODUCCIÓN: La gestión de bancos de germoplasma implica la conservación y uso de dosis seminales, pero también pueden ser una fuente de estudio sobre la calidad de los sementales y las propiedades del semen para su empleo post descongelación. Un criterio para medir la calidad seminal puede basarse en las diferencias de expresión de algunos genes implicados en la espermatogénesis y la maduración espermática. OBJETIVO: Análisis de genes expresados en semen equino criopreservado que ofrezcan una adecuada amplificación, especificidad y estabilidad para su empleo como genes de referencia en futuros estudios de expresión genética. MATERIAL Y MÉTODOS: Purificación de espermatozoides vivos mediante un gradiente de concentración discontinua a partir de pajuelas de semen criopreservado correspondiente a cuatro sementales. Extracción orgánica de ácidos ribonucleicos con tratamiento con la enzima desoxiribonucleasa y la amplificación selectiva de siete genes candidatos mediante retrotranscripción y reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real en un solo paso. RESULTADOS: Tres de los genes seleccionados, β-Actina, Ubiquitina B y proteína Ribosomal L32 se amplifican correctamente. β-Actina, Ubiquitina B manifiestan la mayor estabilidad. CONCLUSIÓN: En los espermatozoides procedentes de muestras de semen criopreservado equino se puede detectar la presencia de ARNm, siendo el gen de la β-Actina y de la Ubiquitina B los más indicados como genes de referencia de los siete candidatos analizados

INTRODUCTION: The germoplasm bank management involves the conservation and use of semen doses, but can also be a source of study on the quality of stallions and semen properties for use after thawing. A criterion for measuring the semen quality may be based on differences in expression of some genes involved in spermatogenesis and sperm maturation. OBJECTIVE: Analysis of genes expressed in equine cryopreserved sperm that can provide adequate amplification, specificity and stability for use as future reference genes in gene expression studies. MATERIAL AND METHODS: Purification of live sperm through a discontinuous concentration gradient from cryopreserved semen straws corresponding to four stallions. Organic extraction of ribonucleic acids with deoxyribonuclease treatment and the selective amplification of seven candidate genes using a retrotranscription and a real time chain reaction of the polymerase in one step mode. Specificity is tested by melting curves and agarose gel electrophoresis. Also the stability of the genes is calculated. RESULTS: Three of the selected genes, β-actin, Ubiquitin B and Ribosomal protein L32 were properly amplified. β-Actin and Ubiquitin B showed the best stability. CONCLUSION: mRNA was amplified from equine cryopreserved semen samples, being the β-Actin and the Ubiquitin B genes the most suitable reference genes of the seven candidates analyzed